碘化丙啶（PI）是一種可嵌入雙鏈DNA堿基對的熒光染料。在正常情況下，PI不能透過完整的細胞膜，因此在進行染色時需要對細胞進行固定和透化處理。處理后的細胞，其PI熒光強度與細胞內的DNA含量成正比。處于G0/G1期的細胞具有二倍體DNA含量為2N，熒光強度最低；S期細胞的DNA正在復制，含量介于2N和4N之間；G2/M期的細胞已完成DNA復制，具有四倍體DNA含量為4N，熒光強度最高。通過流式細胞儀檢測單個細胞的PI熒光信號，即可獲得細胞周期分布圖，并通過專用軟件（如ModFit LT）進行擬合分析。
染色緩沖液和PI染色液2-8 ℃保存，RNase A -20 ℃保存。
1. 為保證上機細胞數足夠，染色前要進行細胞計數，保證細胞數與染料濃度匹配，避免樣本管間差異較大。 一般來說細胞濃度控制在2×105-2×106 cells/ mL。并確保細胞數和固定劑量和染料的濃度相匹配。
2. 使用離心機時，離心300-400 g，且動作盡量輕柔，切記不要用力吹打細胞，盡量在4 ℃下操作，以免影響細胞狀態。
3. 醇類固定后的樣品可以在-20 ℃存放幾個星期，若短時間可置于4 ℃避光保存。
4. 上樣速度不宜過快，細胞濃度不宜過高，一般選擇低速收細胞, 200 cells/s為佳，收目的細胞20000個以上。
5. DNA 染料，尤其是 PI，具有較強的粘性。樣本上機檢測之后，應遵照儀器說明書仔細清洗流式細胞儀， 以免對下一位操作者結果造成影響 。
6. 通過電壓脈沖信號的寬度和面積區別實體組織標本中的粘連細胞群體，最大程度的減少粘連細胞帶來的假陽性結果。
7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
8. 本產品僅作科研用途。
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下載
Q1：峰形過寬，變異系數（CV）值高。
a. 細胞狀態差：細胞生長過度、營養不足或污染，一般取細胞生長至覆蓋率約為80%時（確保細胞未進入生長平臺期）進行實驗，并且貼壁細胞的消化時間要控制好，可邊消化邊觀察，獲得單個細胞，盡量避免DNA的降解，細胞消化固定后不可過度吹打，防止細胞碎片增多導致結果偏差。
b. 樣品制備不佳：細胞懸液不呈單個分散，存在細胞團塊，上機前可用200目篩網過濾。
c. 固定不當：固定劑（乙醇）加入時過快導致細胞結塊；固定時間過長或溫度過高，固定時必須將細胞懸液緩慢滴入乙醇中同時用渦旋震蕩儀輕柔混勻。
d. 染色不充分或過度：孵育時間/溫度不合適，染色液未混勻，確保染色液混勻并嚴格按照說明書孵育時間和條件進行孵育。
e. 經軟件模擬后的周期圖CV值小于8為正常。
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